肺癌干细胞基因Oct—4表达的临床意义(2)
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参见附件。
1.2.4 免疫组织化学 应用免疫组化的方法检测乳腺组织中Oct-4的表达水平[14]。固定肺癌组织和癌旁组织，制成4 μm的组织切片。以二甲苯脱蜡、梯度酒精逐渐水化，再以PBS液冲洗。应用IgG、抗体，分别以1∶100浓度的鼠抗人Oct-4抗体37℃孵育1 h。后用PBS液洗涤后，以最佳生物素化的二抗(Multilink Swine anti-goat/mouse/rabbit immunoglobulin； Dako，Carpinteria，USA)在37℃中孵育30 min。用HRP抗生物素蛋白生物素复合物(以1∶1000的浓度，Vector Laboratories，Burlingame，USA)在室温下30～60 min检测结合生物素基化的抗体。组织片段的免疫印迹以DAB做显色处理，以吉尔苏木素复染这些片段并观察。来自于个体组织的3个片段的全部以单抗体著色，依照盲法，每个片段随机选择十个结构域通过病理来检测Oct-4的表达。根据以下标准来半定量检测Oct-4的表达水平：0代表<1%的赘生细胞印迹阳性；1+代表≥1%而<10%的形态学上明确的赘生细胞印迹阳性；2+代表≥10%的形态学上明确的赘生细胞印迹阳性。显色1+或者2+的单个样本认为该蛋白表达阳性。1.3 统计学方法
应用SPSS统计软件13.0进行统计分析。应用χ2检验、Fisher精确概率、独立t检验来计算肿瘤标志物与其他临床参数间的关系 ......
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