人颗粒裂解肽突变子在大肠埃希菌中的构建与表达研究(2)
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笔者在以往的实验基础上，发现NKG5在大肠埃希菌中表达的过程中可能由于二硫键太多，多表达为包涵体，且影响分子的复性，其可能会影响以后的生物活性实验。因此在本试验中，笔者合成了全序列编码的寡核苷酸片段，将某些位点突变为ser，拟进行可溶性表达探索。实验中通过SDS-PAGE和免疫印迹分析发现在分子量约35 kD处可见一条特异性条带，证明NKG5融合蛋白得到表达，但表达量不够理想。
影响原核表达系统重组蛋白表达效率的因素很多，除了载体系统之外，可能还由外源基因本身的特性决定。颗粒裂解肽是具有广谱的抗病原微生物及杀伤肿瘤细胞的阳离子抗菌肽[9]。有学者等对颗粒裂解肽的晶体结构研究发现，颗粒裂解肽含有5个α-螺旋(H1-H5)结构，较多的正电荷与稳定的两性α-螺旋相结合有助于提高杀菌活性[10-11]。某些结构域可能造成大肠杆菌部分细胞的破裂[12-13]，推测其机制可能是从细胞内部作用于内膜和外膜。而破裂细胞中的少量外源蛋白可能大多被蛋白酶降解，未被降解的微量外源蛋白作用于其他细胞的外膜[14]。另一方面，外源蛋白还可能抑制DNA的复制和转录[11]，进而抑制细胞的生长和代谢。因此，可能是重组肽的结构本身直接或者间接影响了工程菌的表达活性。
综合上述，笔者获得了重组蛋白的生物工程菌 ......
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