重叠PCR克隆Exendin—4的基因及序列分析(1)
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[摘要] 目的 克隆Exendin-4 39肽氨基酸序列基因编码区cDNA。 方法 根据Exendin-4氨基酸序列编码cDNA，设计正、负向引物/模板链，利用重叠延伸PCR法扩增出Exendin-4编码区基因DNA片段；将获得的基因片段插入pGEM-T-Easy质粒中；转化到大肠杆菌DH5α后挑选阳性克隆，利用限制性内切酶及核苷酸序列分析技术鉴定重组质粒。 结果 经质粒DNA酶切分析及序列测定，获得了Exendin-4 DNA片段序列。 结论 本研究成功克隆了Exendin-4 cDNA，为下一步构建Exendin-4真核表达载体打下基础，也为Exendin-4基因治疗糖尿病提供了前提条件。
[关键词] Exendin-4；重叠延伸PCR；基因克隆
[中图分类号] Q78 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2013)05(c)-0013-03
Exendin-4是胰高血糖素样肽-1(GLP-1)受体长效激动剂，具有与GLP-1相似的降血糖活性，目前已研发成为首个“模仿肠降血糖素”治疗2型糖尿病的药物——Exenatide[1-2]。但是Exenatide需每日注射，对糖尿病患者的治疗很不方便[3]，并且天然Exendin-4的提取成本高，难以满足临床应用需要[4]，用基因工程方法生产前景广阔。由于Exendin-4缺乏模板，本实验利用重叠延伸PCR技术扩增出Exendin-4目的基因编码区DNA片段，成功构建了Exendin-4表达载体 ......
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