虫草属分子聚丙烯酰胺凝胶电泳银染检测研究(2)
 |
| 第1页 |
参见附件。
2.3 凝胶的制备
先用适量双蒸水溶解尿素，再加入丙烯酰胺和 N，N’-亚甲叉双丙烯酰胺混合溶液(Acr&Bis)溶液和10×硼酸(TBE)缓冲液，再用双蒸水调终体积至99.2 mL，并用0.45 mm的滤膜过滤，然后再加过硫酸铵和四甲基乙二胺(TEMED)。表1为配制3%～6%不同聚丙烯酰胺凝胶浓度所需尿素、Acr&Bis、10×TBE缓冲液、10%过硫酸铵、TEMED、双蒸水的配方。
2.4 测序凝胶银染显色步骤
2.4.1 胶固定 将聚丙烯酰胺凝胶板放入容器中，用配制号的固定溶液浸没，用摇床振荡至标记样品的染色带小时。
2.4.2 胶染色 将固定好的聚丙烯酰胺凝胶分离，对出现分子指纹显色的聚丙烯酰胺凝胶板进行漂洗，时间控制在6 s以内，漂洗好后即刻放入配好的染色液中进行染色，摇床充分震荡15 min。
2.4.3 胶清洗 用双蒸水充分清洗，具体方法为振荡洗胶3次，每次5 min。
2.4.4 胶染色终止 终止显色反应，将聚丙烯酰胺凝胶放入终止液中，固定凝胶并干胶。
3 结果
3.1 聚丙烯酰胺凝胶电泳银染结果
聚丙烯酰胺凝胶浓度为6%时，分子迁移率和多态性均符合虫草属分子的聚丙烯酰胺凝胶电泳检测需要，见图1。银染中胶显色步骤中显影液为强碱NaOH和0.5%的甲醛溶液，且NaOH的浓度为2%。
3.2 不同Ag+浓度对虫草属DNA聚丙烯酰胺电泳多态性显示的影响
由表2可见，虫草属DNA在0.3%Ag+浓度的聚丙烯酰胺凝胶多态性最佳，多态性条带数达到80以上，且染色背景清晰。
3.3 常见几种方法对虫草属DNA聚丙烯酰胺电泳多态性显示的影响
由表3可见 ......
您现在查看是摘要介绍页，详见PDF附件。