竞争化学发光酶免疫分析检测血清透明质酸方法的建立
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2013年8月25日
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刘爱霞 侯俊 刘佳 徐军 赵静 郭静霞 闫静肖 李伯安 解放军第三〇二医院临检中心;解放军第三〇二医院实验技术保障中心;热景生物技术有限公司;
【摘要】目的建立人血清透明质酸(HA)化学发光酶免疫定量检测分析方法。方法以偶联了牛血清白蛋白的透明质酸包被,以辣根过氧化物酶标记透明质酸结合蛋白(HABP),以过氧化氢(H2O2)-鲁米诺(luminol)化学发光体系作为检测体系,采用竞争法的反应模式,优化筛选温育条件、抗体包被条件、酶标记物稀释度和发光反应时间等条件。同时进行回收实验、热稳定性等实验,并随机选取60例肝纤维化患者血清与进口试剂进行比对实验。结果所建立方法的检出限为6.12μg/L,批内和批间变异均小于10%。检测HA的临床高、中、低值血清回收率为分别为93.5%、95.6%和101.2%;在4℃和37℃条件下分别进行了3、5、7 d的稳定性考察,线性相关系数均0.98,标准偏差9%。比对实验分析证明2种方法差异无统计学意义(P=0.620.05)。结论成功建立定量HA微孔板化学发光酶免疫分析方法,该方法具有较高的准确性、灵敏度及良好的重复性,并与进口试剂检测结果一致。
【关键词】 透明质酸 竞争化学发光酶免疫分析 肝纤维化
【基金】首都医学发展科研基金重点项目(编号2005-2038)
【分类号】R446.1;O657.3
透明质酸(hyaluronic acid,HA),又称玻璃酸、玻尿酸(hyaluronic acid,HA),是一种独特的线性大分子黏多糖,分子式为(C14H21NO11)n。通常将玻璃酸及其反离子所生成的离子对或盐统称为HA[1-2]。HA是肝脏细胞外基质中蛋白多糖的一个组成成分,它由肝内间质细胞合成,内皮细胞摄取降
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