针对HP450基因shRNA真核表达载体的质粒转染(2)
2 结果
如图1～3所示(封三)，转染6、12、24 h后在荧光倒置显微镜下观察细胞状态，可见因为pGPH1/GFP/Neo质粒本身带有GFP，BRL细胞均有不同数量的绿色荧光， 且随时间增长，荧光数量呈正比例增长，说明转染质粒在BRL细胞中有明显表达。
3 讨论
基因转染技术在研究基因的结构和功能中是不可缺少的，正在兴起的基因治疗也是因为基因转染技术的发展而步入实用阶段。目前常用的RNA干扰方法是化学合成siRNA片段，构建病毒载体以及shRNA的真核表达载体。化学合成siRNA的缺点是价格较贵，效率只有转录合成shRNA的1/10～1/40，基因抑制持续时间较短，对细胞毒性较大，转染效率较低，合成工艺上也存在不可弥补的缺陷。病毒载体的主要缺点是价格较高，耗费时间比较长，不适用于大量筛选siRNA序列，对实验条件要求较高[5-6]。本实验选择构建shRNA的真核表达载体，是因为该实验方法经济易操作，且质粒载体能够在细胞中表达shRNA，是一种干扰RNA的良好方式，与化学合成siRNA的作用一致，相比较而言，持续时间更长，费用更低，是作为筛选有效基因干扰片段的常用方法。
有效的shRNA序列设计是RNA干扰实验中重要的一步 ......
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如图1～3所示(封三)，转染6、12、24 h后在荧光倒置显微镜下观察细胞状态，可见因为pGPH1/GFP/Neo质粒本身带有GFP，BRL细胞均有不同数量的绿色荧光， 且随时间增长，荧光数量呈正比例增长，说明转染质粒在BRL细胞中有明显表达。
3 讨论
基因转染技术在研究基因的结构和功能中是不可缺少的，正在兴起的基因治疗也是因为基因转染技术的发展而步入实用阶段。目前常用的RNA干扰方法是化学合成siRNA片段，构建病毒载体以及shRNA的真核表达载体。化学合成siRNA的缺点是价格较贵，效率只有转录合成shRNA的1/10～1/40，基因抑制持续时间较短，对细胞毒性较大，转染效率较低，合成工艺上也存在不可弥补的缺陷。病毒载体的主要缺点是价格较高，耗费时间比较长，不适用于大量筛选siRNA序列，对实验条件要求较高[5-6]。本实验选择构建shRNA的真核表达载体，是因为该实验方法经济易操作，且质粒载体能够在细胞中表达shRNA，是一种干扰RNA的良好方式，与化学合成siRNA的作用一致，相比较而言，持续时间更长，费用更低，是作为筛选有效基因干扰片段的常用方法。
有效的shRNA序列设计是RNA干扰实验中重要的一步 ......
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