RNA干扰HPV E6下调eIF4E转录表达抑制宫颈癌Hela细胞增殖并影响细胞周期进程研究(2)

http://www.100md.com 2014年1月15日 王森 高敏(等)

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     1 材料与方法

    1.1 材料

    1.1.1 基本材料 CCK-8试剂盒购自上海生工，脂质体Lipofectamine 2000购自Invitrogen公司，胎牛血清及DMEM培养基购自Gibco公司，eIF4E抗体购自Santacruz。

    1.1.2 细胞 本研究采用HPV+的宫颈癌Hella细胞。细胞培养于37℃，5%CO2培养箱中，使用标准培养基(RPMI 1640)。

    1.1.3 质粒 E6的shRNA干扰质粒(shE6)由上海吉凯公司构建完成。其中，三对shRNA框架序列分别为E6-shRNA-1(stem：CCTACAAGCTACCTGATCT，loop：AGTGAAGCCACAGATGTA，stem：AGATCAGGTAGCTTGTA GG)， E6-shRNA-2(stem： GGAACTTACAGAGGTATTT， Loop：AGTGAAGCCACAGATGTA，stem：AAATA CCTCTG TAAGTTCC)，E6-shRNA-3(stem： GCAGAGAAACACAAGTATA，loop：AGTGAAGCCACAGATGTA，stem：TATACTTGTGTTTCTCTGC)。

    1.2 方法

    1.2.1 实验分组 实验分为三组：MOCK组(即：未处理 Hela 细胞组)，NC组(即：空白质粒组) ......

    http://www.100md.com/html/paper/1673-0089/2014/02/01-1.htm

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