MGMT基因甲基化状态在结直肠锯齿状病变中的表达及意义(3)
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参见附件。
1.2.7 结果判断标准 MethyLight结果判断标准[11]：同时扩增目的基因(MGMT)和内参基因(β-actin)，根据标准曲线得到两者的原始拷贝数，计算标准甲基化指数(normalized index of methylation，NIM)其定义为：NIM=[(MGMT sample/MGMT positive)β-actin sample/β-actin positive)]×100，其中MGMT sample指样本中甲基化MGMT基因的拷贝数，MGMT positive指阳性对照中甲基化MGMT基因的拷贝数，β-actin sample和β-actin positve与上述相同。NIM≥4为甲基化，NIM<4为非甲基化。免疫组化判断标准[12]：MGMT阳性定位于细胞核；标记指数计算方法：每张切片低倍镜下选择组织结构良好、比较清晰的5个阳性细胞最为密集的区域，每个区域在高倍镜下，计数100个细胞中的阳性细胞指数(不包括间质细胞和其他非肿瘤细胞)，计算阳性细胞数平均值的百分率。标记指数计分：Ⅰ级10%～25%为1分，Ⅱ级>25%～50%为2分，Ⅲ级>50%～75%为3分，Ⅳ级>75%～100%为4分。染色强度计分：Ⅰ级淡黄色为1分，Ⅱ级棕黄色为2分，Ⅲ级棕褐色为3分。每张切片两种评分之乘积为该切片最后的表达强度：0分为(-)，1～3分为(+)，4～6分为(++)，≥7分为(+++)。
1.3 统计学方法
所有数据采用SPSS 19.0统计软件，正态分布计量资料以均数±标准差(x±s)表示。甲基化结果运用χ2及Fisher确切概率法，免疫组化结果使用多组有序秩和检验，两组间比较运用Bonferroni检验，甲基化和蛋白表达相关性及甲基化和年龄相关性运用Pearson相关法进行统计学处理，以P < 0.05为差异有统计学意义。
2 结果
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