CHOP/GADD153在胎儿生长受限患者胎盘组织中的表达及意义(2)
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1.2 方法
1.2.1 免疫组化法检测胎盘组织中CHOP/GADD153的表达 胎盘组织福尔马林固定，石蜡包埋，制成切片。切片脱蜡、水化，采用胃蛋白酶进行抗原修复，滴加封闭液，37℃湿盒孵育30 min，滴加一抗(Cell Signaling公司，美国，鼠抗人，1∶100)，37℃湿盒孵育2 h，TBS-T洗涤5 min×3次，滴加封闭液5 min×3次，滴加二抗(Cell Signaling公司，美国，羊抗鼠IgG，1∶200)，37℃湿盒孵育30 min，TBS-T洗涤5 min×3次，滴加试剂Tween20，37℃湿盒孵育20 min；加HRP-SA，37℃湿盒孵育30 min，TBS-T洗涤5 min×3次，TBS洗涤5 min×2次，二氨基联苯胺(DAB)显色、复染、脱水、透明、封片，显微镜下观察成像。磷酸盐缓冲液(PBS)代替一抗作阴性对照。每张切片随机取5个非重叠400倍镜视野，以镜下细胞内出现棕黄色颗粒或团块者为阳性细胞，阳性细胞占50%～100%为强阳性(+++)，占25%～<50%为中度阳性(++)，占5%～<25%为弱阳性(+)，占0%～<5%为阴性(-)。观察各组CHOP/GADD153表达及阳性细胞的分布情况。免疫组化表达总阳性率=(强阳性+中度阳性+弱阳性)细胞数/细胞总数×100%。
1.2.2 Tunnel法检测胎盘组织细胞凋亡 所用试剂为细胞凋亡检测试剂盒，购自武汉博士德生物技术有限公司。胎盘组织福尔马林固定，石蜡包埋，制成切片。切片脱蜡入水。3% H2O2处理10 min，蒸馏水洗涤2 min×3次；proteinase K消化10～15 min ......
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