温州地区丙型肝炎病毒感染者基因型分布特征及其临床意义分析(2)

http://www.100md.com 2014年1月25日 林荣 王彬 刘燕飞

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     1 资料与方法

    1.1 一般资料

    收集2010年1月～2012年12月温州市中心血站(以下简称“我站”)自愿献血者244例，经ELISA方法证实HCV抗体阳性者122例，年龄23～56岁，其中男68例，女54例；健康者122例，年龄20～58岁，其中男70例，女52例。收集同期温州某医院门诊患者122例，其中，输血后丙肝14例，男4例，女10例，年龄15～64岁；散发性丙肝25例，男15例，女10例，年龄17～60岁；肝硬化40例，男27例，女13例，年龄11～69岁；原发性肝癌43例，男21倒，女22例，年龄23～68岁。采集静脉血，全部血清标本均来自我站检验科及医院门诊患者。所有患者诊断均符合2000年9月西安第10次全国传染病与寄生虫病和肝病学术会议修订的《病毒性肝炎防治方案》的标准：血清抗-HCV阳性、HCV RNA>80 copies/mL，伴或不伴肝功能异常，均伴有不同程度的肝硬化。两组研究对象年龄、性别比例等一般资料比较，差异无统计学意义(P > 0.05)，具有可比性。且研究对象均知情同意，已经我站业务科通过。

    1.2 试剂

    全血RNA提取试剂盒(北京艾比根生物技术有限公司)；HCV抗体诊断试剂盒(北京科美东雅生物技术有限公司)；Taq酶、引物、RNA酶抑制剂(上海玉博生物科技有限公司)；M-MuLV逆转录酶(Simga公司)。

    1.3 方法

    1.3.1 PCR引物设计 自Genebank中查找HCV 1a、1b、2b、3a型全序列，查找各型5′ UTR区共同序列，并以此自行设计引物。外引物：S1(nt34～54)：5′-ATCACTCCCCTGTGAGGAAC-3′；S2(nt279～299)：5′-CCCTATCAGGCAGTACCACA-3′；内引物：S3(nt39～59)：5′-TCCCCTGTGAGGAACTACTG-3′；S4(nt274～294)：5′-TCAGGCAGTACCACAAGGCC-3′ ......

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