小分子NEK2干扰RNA对肺癌细胞耐药的研究(2)
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1 材料与方法
1.1 材料试剂与细胞系
人肺腺癌敏感细胞系A549细胞和耐顺铂(DDP)人肺腺癌细胞系A549/DDP细胞，均购自第三军医大学新桥医院呼吸病研究所。顺铂、阿霉素(江苏豪森药业有限公司)。CO2细胞培养箱(Binder，德国)，激光共聚焦显微镜(Bio-Rad，美国)，RNAiso plus kit、PrimeScriptR RT reagent kit、LipofectamineTM RNAiMAX(Invitrogen，美国)，ECL化学发光试剂盒(Boehringer Mannheim，德国)，BCA蛋白浓度测定试剂盒(Takara，大连)，RPMI-1640培养基、MTT、DMSO、TBST缓冲液、胎牛血清(FCS)(GIBCO BRL，美国)。
1.2 细胞培养
人肺癌A549细胞培养于含10%胎牛血清(FBS)、100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素的改良型RPMI-1640培养基中，并置于37℃、5%CO2、达到饱和湿度培养箱中培养。每2～3天以0.25%的胰蛋白酶进行消化传代。A549/DDP细胞用含10% FBS的RPMI-1640培养液进行复苏，培养2～3 d后待细胞生长状态良好时用半量顺铂培养液(顺铂浓度：0.5 μg/mL)培养1夜，再以全量顺铂培养液(顺铂浓度：1 μg/mL)培养1夜，在37℃、5%CO2条件下培养，每2～3天传代1次 ......
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