细菌鞭毛染色培养条件的研究(2)
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1 材料与方法
1.1 材料
菌种为普通变形杆菌，保存于川北医学院病原生物与免疫学教学实验中心。实验中所用的试剂： 肉浸膏、蛋白胨、琼脂粉购于杭州天和微生物试剂有限公司；NaCl、FeCl3购于成都科龙化工试剂厂；硝酸银购于天津市博迪化工有限公司；兔血来源于川北医学院动物中心；培养箱购于上海精宏实验设备有限公司(型号为SHP-250)。
1.2 培养基[12]
1.2.1 基础肉汤培养基 于1000 mL蒸馏水中加入固体物质，包括3.0 g肉浸膏，10.0 g蛋白胨，5.0 g NaCl，1000 ml蒸馏水，混合加热溶解；校正pH至7.4～7.6，煮沸3～5 min，用滤纸过滤；分装于适当试管内，121℃高压蒸汽灭菌20 min后，置阴暗处贮存备用。
1.2.2 基础琼脂培养基 于基础肉汤培养基中加入15%的琼脂粉，121℃高压蒸汽灭菌20 min后倒入平板上冷却待用。
1.2.3 血琼脂培养基 将已灭菌的普通琼脂培养基加热融化，待其冷却至50℃左右，在无菌条件下加入脱纤维兔血5%～10%，轻摇匀(勿使有气泡)后倒入平板上冷却待用。
1.3 菌种
从菌种库取出普通变形杆菌，采用点接法将细菌接种于基础培养基平板上，放入37℃恒温培养箱里连续培养18～24 h，后再转接于另一新鲜平板培养基中继续培育，如此重复培育3代(次)后备用。
1.4 染液制作
媒染剂A[13]：3.0 g FeCl3·6H2O，溶于0.01 mol/L的HCl溶液100 mL中，室温存放，长期稳定。
媒染剂B[13]：单宁酸15.0 g溶解于100 mL蒸馏水中，加入37%甲醛1.0 mL。室温存放，长期稳定。
银染液C[14]：AgNO3 5 ......
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