以Pin1为靶点的抗肿瘤药物的筛选及活性评价
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2014年6月5日
酵母细胞,Pin抑制剂,酶学分析,苯并呋喃衍生物
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张晶 刘伟 陈云雨 刘宗英 司书毅 中国医学科学院医药生物技术研究所;
【摘要】目的评价以酵母细胞为模式菌高通量筛选Pin1抑制剂的方法。方法以野生型酵母菌W303-1a和温度敏感型突变株L94P为模式菌,筛选Pin1抑制剂;四甲基偶氮唑盐(MTT)比色法检验候选化合物对肿瘤细胞的杀伤作用;体外酶学实验验证候选化合物对Pin1的抑制作用;流式细胞仪检测候选化合物对肿瘤细胞周期和凋亡的阻滞和诱导作用;免疫印迹(Western Blotting)分析候选化合物对肿瘤细胞中Cyclin D1和Pin1表达量的影响。结果候选化合物显示出对温度敏感型突变株的特异性抑制作用;MTT实验证实化合物能抑制肿瘤细胞的增殖;酶学实验和Western Blotting共同阐释了化合物对重组纯化的人Pin1具抑制作用但并不影响Pin1蛋白的表达;流式结果表明化合物能诱导细胞发生凋亡和G0/G1期阻滞;化合物还能抑制肿瘤细胞中Cyclin D1的蛋白表达并呈剂量依赖性。结论首次发现Pin1为苯并呋喃衍生物抗肿瘤作用的靶点之一。
【关键词】 酵母细胞 Pin抑制剂 酶学分析 苯并呋喃衍生物
【基金】国家自然科学基金资助项目(编号81128014)
【分类号】R96
1996年,Pin1作为属于微小菌素蛋白家族的多肽脯氨酰基异构酶被首次报道[1],它催化磷酸化的丝/苏-脯氨酸基序异构化,能多部位、多环节控制包括细胞周期、转录和剪切、DNA复制检验点、DNA损伤应答、神经元存活和干细胞发育等许多细胞过程[2-3]。Pin1功能紊乱能导致人类的多种疾
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