siRNA干扰人核糖核酸酶抑制因子在HeLa细胞中的表达鉴定
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2014年9月5日
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李坤 丁宁 李琳 大连大学医学院检验系;大连市妇幼保健院检验科;
【摘要】目的鉴定已构建的干扰人核糖核酸酶抑制因子(hRI)的siRNA表达载体pKD-dsRI的干扰效果。方法用脂质体法将所构建的pKD-dsRI与充当报告基因的重组绿色荧光蛋白融合hRI的逆转录病毒载体(pLNCXEGFP-C1-hri)共转染到人宫颈癌HeLa细胞中。实验设4组:空白细胞组(未转染组)、pLNCX-EGFP-C1-hri转染组(对照组1)、pKD+pLNCX-EGFP-C1-hri共转染组(对照组2)及pKD-dsRI+pLNCX-EGFP-C1-hri共转染组(干扰组)。采用RT-PCR和Western blotting检测egfp-hri基因在转录后基因水平和蛋白质水平的表达。结果干扰组egfp-hri基因的mRNA转录水平和蛋白表达水平较对照组1与对照组2分别下降了91%、85%和83%、81%(P0.05)。结论已成功构建了针对hRI的siRNA表达载体。
【关键词】 人核糖核酸酶抑制因子 siRNA 鉴定
【基金】辽宁省教育厅科研课题(编号L2011219)
【分类号】R737.33
恶性肿瘤一直是严重威胁人类健康的重大疾病之一。目前其临床治疗仍以传统的手术、放、化疗为主,具有很多缺点,如术后易复发、患者痛苦大、生存质量差、生存期短等。寻找和发现治疗肿瘤的新方法和新途径仍是当今医学研究的热点和难点。目前研究认为,实体瘤的生长依赖于新血管
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