乳腺癌BAG—1基因表达与表皮生长因子受体表达的相关性(2)
1.2 试验方法
1.2.1 细胞培养
从冰箱中取出细胞后进行细胞复苏。观察细胞长满培养瓶的平底壁时，倒掉培养液，冲洗后，胰蛋白酶消化，37℃孵育3 min，观察细胞变圆、间隙变大时，加入RPMI-1640培养液终止消化，细胞分瓶培养。
1.2.2 实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测EGFR mRNA和BAG-1 mRNA的表达
1.2.2.1 总RNA提取 (5～10)×106个细胞中加Trizol 1 mL，吹吸裂解后室温静置5 min。取出匀浆，加氯仿200 μL，混匀，4℃下12 000 r/min 离心15 min。取上层，加等体积的异丙醇，混匀，室温下放置10 min，4℃下12 000 r/min离心10 min。弃上清，加75%乙醇1 mL，4℃，7500 r/min离心5 min ......
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1.2.1 细胞培养
从冰箱中取出细胞后进行细胞复苏。观察细胞长满培养瓶的平底壁时，倒掉培养液，冲洗后，胰蛋白酶消化，37℃孵育3 min，观察细胞变圆、间隙变大时，加入RPMI-1640培养液终止消化，细胞分瓶培养。
1.2.2 实时聚合酶链反应(Real-time PCR)检测EGFR mRNA和BAG-1 mRNA的表达
1.2.2.1 总RNA提取 (5～10)×106个细胞中加Trizol 1 mL，吹吸裂解后室温静置5 min。取出匀浆，加氯仿200 μL，混匀，4℃下12 000 r/min 离心15 min。取上层，加等体积的异丙醇，混匀，室温下放置10 min，4℃下12 000 r/min离心10 min。弃上清，加75%乙醇1 mL，4℃，7500 r/min离心5 min ......
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