小鼠肺癌原位模型的建立(3)
2 结果
2.1 稳定表达虫萤光素酶的LLC细胞系构建完成
由于EGFP-FFLuc-HyTk-pMG^pac载体在同一启动子下表达EGFP(增强型绿色荧光蛋白)和虫荧光素本酶,因此,EGFP的表达代表了虫荧光素本酶的表达。如图1(封三)所示,LLC细胞在转染EGFP-FFLuc-HyTk-pMG^pac质粒DNA后,稳定表达EGFP,表示稳定表达虫荧光素本酶的LLC细胞系构建成功,可以用于进一步研究。
2.2 小动物活体成像结果
将模型小鼠于造模后的第4天按照上述操作方法进行第1次活体成像,结果如图2(封三),共造模17只小鼠,除第8号小鼠出现腹腔种植转移外,其他16只小鼠均在胸部出现明显荧光素酶信号,表示在胸部有肿瘤形成,其造模成功率为94%。
2.3 病理学检测
小鼠活体成像结果说明在小鼠胸部有肿瘤形成,进行病理检查进一步明确肿瘤在肺组织内而非在胸腔内。按照常规病理切片流程,取材:将10只小鼠于术后第4天活体成像后处死并立即进行活体取材,取出肺组织,此时肉眼观察肺组织尚未见明显的病变表现;接着使用10%中性福尔马林溶液肺部灌流、固定;二甲苯透明、浸石蜡、包埋、切片、HE染色:二甲苯脱蜡2次 ......
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2.1 稳定表达虫萤光素酶的LLC细胞系构建完成
由于EGFP-FFLuc-HyTk-pMG^pac载体在同一启动子下表达EGFP(增强型绿色荧光蛋白)和虫荧光素本酶,因此,EGFP的表达代表了虫荧光素本酶的表达。如图1(封三)所示,LLC细胞在转染EGFP-FFLuc-HyTk-pMG^pac质粒DNA后,稳定表达EGFP,表示稳定表达虫荧光素本酶的LLC细胞系构建成功,可以用于进一步研究。
2.2 小动物活体成像结果
将模型小鼠于造模后的第4天按照上述操作方法进行第1次活体成像,结果如图2(封三),共造模17只小鼠,除第8号小鼠出现腹腔种植转移外,其他16只小鼠均在胸部出现明显荧光素酶信号,表示在胸部有肿瘤形成,其造模成功率为94%。
2.3 病理学检测
小鼠活体成像结果说明在小鼠胸部有肿瘤形成,进行病理检查进一步明确肿瘤在肺组织内而非在胸腔内。按照常规病理切片流程,取材:将10只小鼠于术后第4天活体成像后处死并立即进行活体取材,取出肺组织,此时肉眼观察肺组织尚未见明显的病变表现;接着使用10%中性福尔马林溶液肺部灌流、固定;二甲苯透明、浸石蜡、包埋、切片、HE染色:二甲苯脱蜡2次 ......
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