生长抑制因子5抑制肺癌细胞增殖作用的研究(2)
1.4 检测ING5对肺癌细胞增殖的抑制
将对数生长期A549-control和A549-ING5-OE细胞用胰蛋白酶消化液消化，计数，调整细胞密度为1×104个/孔，接种至24孔板，两种细胞各种4个复孔，每孔加1 mL 10%胎牛血清DMEM培养液。从细胞贴壁开始计时24、48、72、96 h后各计数1次。
1.5 检测ING5对肺癌细胞克隆形成能力的抑制
将对数生长期A549-control和A549-ING5-OE细胞用胰蛋白酶消化液消化，计数，调整细胞密度为300个/孔，接种至6孔板，每孔加2 mL 10%胎牛血清DMEM培养液。细胞接种5 d后每孔各加500 μL胎牛血清继续培养。贴壁生长15 d后，PBS洗3次，4%多聚甲醛固定15 min。固定后用0.1%结晶紫溶液染色15 min，PBS轻轻冲洗细胞，室温风干后计数多于50个细胞的克隆。根据公式计算克隆形成率：克隆形成率(%)=克隆数/300×100%。
1.6 ING5抑制裸鼠皮下成瘤实验
出生4周雄性裸鼠 ......
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将对数生长期A549-control和A549-ING5-OE细胞用胰蛋白酶消化液消化，计数，调整细胞密度为1×104个/孔，接种至24孔板，两种细胞各种4个复孔，每孔加1 mL 10%胎牛血清DMEM培养液。从细胞贴壁开始计时24、48、72、96 h后各计数1次。
1.5 检测ING5对肺癌细胞克隆形成能力的抑制
将对数生长期A549-control和A549-ING5-OE细胞用胰蛋白酶消化液消化，计数，调整细胞密度为300个/孔，接种至6孔板，每孔加2 mL 10%胎牛血清DMEM培养液。细胞接种5 d后每孔各加500 μL胎牛血清继续培养。贴壁生长15 d后，PBS洗3次，4%多聚甲醛固定15 min。固定后用0.1%结晶紫溶液染色15 min，PBS轻轻冲洗细胞，室温风干后计数多于50个细胞的克隆。根据公式计算克隆形成率：克隆形成率(%)=克隆数/300×100%。
1.6 ING5抑制裸鼠皮下成瘤实验
出生4周雄性裸鼠 ......
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