全反式维甲酸对宫颈癌耐药细胞株HeLa/MMC侵袭、转移能力的影响及其分子机制研究(2)
1.3.4 流式细胞仪检测耐药细胞的细胞周期 用胰酶将1×10-6 mol/L ATRA分别作用3、7 d的实验组细胞及对照组细胞消化成单细胞悬液，预冷过的70%乙醇固定细胞，4℃冰箱保存。上流式细胞仪检测前弃乙醇，加入RNA酶作用30 min，100 μg/mL PI染色液4℃避光染色30 min，细胞经300目过滤网后上机检测。各组测1×104个细胞，经计算机软件处理得出细胞周期各时相百分比(%)。实验重复3次。
1.3.5 半定量RT-PCR分析耐药细胞的c-myc基因表达 收集1×10-6 mol/LATRA分别作用3、7 d的细胞及对照组细胞，按SV总RNA分离试剂盒说明提取细胞RNA。引物序列设计如下：c-myc上游5'-CTC TCA ACG ACA GCA GCC CG-3'，下游5'-AGG TGA TCC AGA CTC TGA CC-3'；β-actin上游5'-CGT CTG GAC CTG GCT GGC CGG GAC C-3' ......
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1.3.5 半定量RT-PCR分析耐药细胞的c-myc基因表达 收集1×10-6 mol/LATRA分别作用3、7 d的细胞及对照组细胞，按SV总RNA分离试剂盒说明提取细胞RNA。引物序列设计如下：c-myc上游5'-CTC TCA ACG ACA GCA GCC CG-3'，下游5'-AGG TGA TCC AGA CTC TGA CC-3'；β-actin上游5'-CGT CTG GAC CTG GCT GGC CGG GAC C-3' ......
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