单细胞聚团拟胚体形成诱导人多能干细胞造血分化的技术优化(1)

http://www.100md.com 2015年6月5日 中国医药导报2015年第16期

     [摘要] 目的 优化利用单细胞聚团拟胚体(Spin-EB)培养诱导人多能干细胞造血分化的方式。 方法 采用AggreWellTM 800及V-96孔板两种培养板形成Spin-EB，在骨形成蛋白-4(BMP-4)、血管内皮生长因子(VEGF)及碱性成纤维生长因子(bFGF)组合培养基中诱导造血分化，通过流式细胞术检测不同分化条件下CD34+细胞的比例；选取CD34+细胞比例高的拟胚体(EB)形成方式，并通过造血集落形成实验及红细胞分化培养实验，验证EB来源的CD34+细胞的造血集落形成和红系分化能力。 结果 流式分析结果显示，在AggreWellTM800培养板中培养所得的EB，其CD34+造血干祖细胞比例为22.6%，V-96孔板按照形成EB的细胞数目，CD34+造血干祖细胞比例分别为：3000个细胞/孔为10.8%、6000个细胞/孔为1.28%、9000个细胞/孔为1.23% ......