液基薄层制片技术制作外周血淋巴细胞涂片方法学的建立及免疫组化染色应用(2)
1 资料与方法
1.1 一般资料
选择健康自愿捐献外周血者5名，均无淋巴造血系统疾病等慢性病史、恶性肿瘤病史、近期急性感染病史，1个月内未服用任何药物；男2名，女3名，年龄25～43岁，平均32.6岁；每人抽取外周静脉血3 mL，常规EDTA抗凝管抗凝。
1.2 主要试剂和仪器
淋巴细胞分离液(北京Solarbio)；液基细胞处理试剂盒(宁波美生医疗器材有限公司)；兔抗人CD3单克隆抗体(1∶200，福建迈新生物技术有限公司)；兔抗人CD20单克隆抗体(1∶300，福建迈新生物技术有限公司)；自动细胞制片机(宁波美生医疗器材有限公司)；低温冰箱(青岛海尔)；可控式恒温干燥箱(山东潍坊精鹰医疗器械有限公司)。
1.3 外周血淋巴细胞提取
应用Ficoll-hypaque密度梯度离心法(1800 r/min)分离淋巴细胞，具体步骤如下：吸取新鲜EDTA抗凝血(30 min内)2 mL，室温下13 000 r/min离心3 min，去除上层血浆后加入4 mL淋巴细胞分离液，低温离心机离心30 min(4℃，1800 r/min)，小心缓慢吸取第2层白色絮状物(淋巴细胞层) ......
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1.1 一般资料
选择健康自愿捐献外周血者5名，均无淋巴造血系统疾病等慢性病史、恶性肿瘤病史、近期急性感染病史，1个月内未服用任何药物；男2名，女3名，年龄25～43岁，平均32.6岁；每人抽取外周静脉血3 mL，常规EDTA抗凝管抗凝。
1.2 主要试剂和仪器
淋巴细胞分离液(北京Solarbio)；液基细胞处理试剂盒(宁波美生医疗器材有限公司)；兔抗人CD3单克隆抗体(1∶200，福建迈新生物技术有限公司)；兔抗人CD20单克隆抗体(1∶300，福建迈新生物技术有限公司)；自动细胞制片机(宁波美生医疗器材有限公司)；低温冰箱(青岛海尔)；可控式恒温干燥箱(山东潍坊精鹰医疗器械有限公司)。
1.3 外周血淋巴细胞提取
应用Ficoll-hypaque密度梯度离心法(1800 r/min)分离淋巴细胞，具体步骤如下：吸取新鲜EDTA抗凝血(30 min内)2 mL，室温下13 000 r/min离心3 min，去除上层血浆后加入4 mL淋巴细胞分离液，低温离心机离心30 min(4℃，1800 r/min)，小心缓慢吸取第2层白色絮状物(淋巴细胞层) ......
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