硫氧环蛋白过氧化物酶3在血管紧张素Ⅱ诱导心肌肥大中的表达(2)

http://www.100md.com 2015年7月5日 中国医药导报2015年第19期

     1材料与方法

    1.1 实验材料

    H9C2大鼠心肌细胞(中国科学院上海生命科学研究院提供)；血管紧张素Ⅱ(Sigma公司)；脑钠素上下游引物(上海吉玛公司)；M-MLV逆转录试剂盒、SYBR+Tap混合剂(美国invitrogen公司)；二氯荧光素二乙酸(Sigma公司)；Prdx-3抗体(Abcam产品)。

    1.2 细胞培养及实验分组

    心肌细胞在含10%胎牛血清浓度的杜尔伯科改良伊格尔培养基(DMEM)中常规培养。细胞在达到70%融合后，给予0.4%血清浓度DMEM培养12 h，使细胞同步化，然后随机分为对照组(仅0.4%血清浓度DMEM)和Ang Ⅱ组(经Ang Ⅱ 1×10-6 mol/L处理)。

    1.3 Real time PCR法检测脑钠素(BNP)mRNA表达[4]

    细胞未经或经Ang Ⅱ刺激6、12、24、48 h，弃培养液，利用Trizol提取细胞总RNA， 定量后取0.5 μg RNA行逆转录。取1 μL cDNA进行Real-time PCR扩增 ......