E3泛素连接酶对卵巢癌细胞系SKOV3/DDP顺铂耐药性的影响(2)
1.6 MTT检测SKOV3/DDP细胞顺铂半数抑制浓度(IC50)的变化取对数生长期细胞进行培养,分别加入终浓度为0(对照组)、4、8、12、16、20、24、28、32、36、40 μg/mL的顺铂培养基培养48 h,每孔加入20 μL 5 mg/mL MTT后培养4 h,弃上清液并在每孔加入200 μL DMSO,振荡10 min使其充分溶解后,酶标仪上测定OD490值。抑制率=(对照组OD值-用药组OD值)/对照组OD值×100%,Logistic回归法计算IC50。相对逆转效率=[IC50(SKOV3/DDP)-IC50(SKOV3+EDD-siRNA)]/[IC50(SKOV3/DDP)-IC50(SKOV3)]×100%。试验重复3次,每次5个复孔。
1.7细胞凋亡检测
20 μg/mL的顺铂处理各组细胞24 h,流式细胞仪检测细胞凋亡率。细胞凋亡的检测参照细胞凋亡试剂盒说明书进行。收集5×105个细胞,加入500 μL结合缓冲液悬浮细胞 ......
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