人多巴胺D2基因启动子区—350A/G多态位点荧光素酶表达载体的构建与鉴定及活性检测(3)
1.2.2 重组荧光素酶表达载体的转染 用常规细胞培养试剂复苏、培养HEK293细胞，经过几次细胞传代，待细胞处于对数生长期时将细胞传入48孔板，置于37℃、5%CO2孵育箱中继续培养，当细胞融合度为80%左右时，按照Lipofectine 2000TM脂质体转染试剂盒说明书，将海肾荧光素酶报告基因质粒pRL-SV40与重组质粒pmirGlo-promoter-A和pmirGlo-promoter-G分别共转染至HEK293细胞，设3个重复孔，转然后 48 h后收集细胞，立即采用双荧光素酶报告基因系统检测荧光强度(相对荧光素酶活性)。
1.2.3 双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性 从细胞培养箱中取出培养48 h的48孔板，弃去培养基，每孔细胞先用PBS洗2次，然后每孔加入200 μL细胞裂解液(passive lysis buffer，PLB)，室温放置于水平摇床上用120 r/min、摇15 min以使细胞充分裂解。收集细胞裂解液，同时用移液器上下吹打数次以充分混匀细胞裂解液，将细胞裂解液转移至1.5 mL EP管中 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4303 字符。
1.2.3 双荧光素酶报告基因检测系统检测荧光素酶活性 从细胞培养箱中取出培养48 h的48孔板，弃去培养基，每孔细胞先用PBS洗2次，然后每孔加入200 μL细胞裂解液(passive lysis buffer，PLB)，室温放置于水平摇床上用120 r/min、摇15 min以使细胞充分裂解。收集细胞裂解液，同时用移液器上下吹打数次以充分混匀细胞裂解液，将细胞裂解液转移至1.5 mL EP管中 ......
您现在查看是摘要页，全文长 4303 字符。