稳定抑制PAK2蛋白表达的HUH—7细胞株的建立(1)
[摘要] 目的 为研究细胞周期相关因子PAK2在原发性肝癌中的作用，拟用shRNA干扰技术建立稳定抑制PAK2蛋白表达的HUH-7肝癌细胞系。 方法 用基因转染技术将人PAK2的3个shRNA片段分别克隆至慢病毒载体pHBLV-U6-ZsGreen-Puro，包装成病毒后利用脂质体将载体病毒转染至HUH-7细胞，利用G418筛选稳定表达shRNA的细胞。利用Real-time PCR和Western blotting方法分别鉴定转染细胞内PAK2的RNA及蛋白表达水平。 结果 sh1-PAK2 HUH-7、sh2-PAK2 HUH-7和sh3-PAK2病毒载体均可转染至HUH-7细胞系，且转染效率较高(>80%)。Real time-PCR结果显示，与对照组sh-cont比较，转染sh1-PAK2、sh2-PAK2和sh3-PAK可明显抑制HUH-7细胞内PAK2-mRNA的表达 ......
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