缺血性脑卒中与4—羟基壬烯醛的相关性研究(2)
1.4 大鼠血清4-HNE检测
3、6月龄大鼠眼眶取血约1.5 mL，3000 r/min离心15 min，取上清。每孔加入底物工作液100 μL和酶标抗体工作液10 μL，各孔加入标准品或待测样品20 μL。振荡混匀后将反应板置37℃ 15 min后，每孔加入100 μL终止液，混匀，30 min内用酶标仪在490 nm处测吸光值。以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 ng/mL为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。根据样品OD值计算出相应4-HNE含量。
1.5 人血浆中4-HNE检测
BCA测定血浆蛋白浓度，用PBS调整浓度至10 μg/mL。每孔加入100 μL样品或标准品，4℃过夜，PBS清洗3次，甩干；每孔再加入200 μL Assay Diluent，摇床摇晃1～2 h，Wash Buffer 清洗3次，甩干；每孔加入100 μL抗4-HNE抗体，室温孵育1 h，PBS清洗3次，每孔加入100 μL二抗HRP conjugate ......
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3、6月龄大鼠眼眶取血约1.5 mL，3000 r/min离心15 min，取上清。每孔加入底物工作液100 μL和酶标抗体工作液10 μL，各孔加入标准品或待测样品20 μL。振荡混匀后将反应板置37℃ 15 min后，每孔加入100 μL终止液，混匀，30 min内用酶标仪在490 nm处测吸光值。以标准品4000、2000、1000、500、250、125、62.5、0 ng/mL为横坐标，OD值为纵坐标，绘出标准曲线。根据样品OD值计算出相应4-HNE含量。
1.5 人血浆中4-HNE检测
BCA测定血浆蛋白浓度，用PBS调整浓度至10 μg/mL。每孔加入100 μL样品或标准品，4℃过夜，PBS清洗3次，甩干；每孔再加入200 μL Assay Diluent，摇床摇晃1～2 h，Wash Buffer 清洗3次，甩干；每孔加入100 μL抗4-HNE抗体，室温孵育1 h，PBS清洗3次，每孔加入100 μL二抗HRP conjugate ......
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