RNA干扰(RNA interference，RNAi)近年来取得相当大的进展，研究人员利用RNAi作为研究工具引入到细胞或整个生物RNAi试剂，用以识别新的细胞通路和潜在的药物靶点[4]。慢病毒载体是一种高效率的转基因和基因治疗工具，其最大优势在于能够感染分裂和静止状态下的细胞，并且能够高效、稳定地整合于宿主细胞内[5]。本实验通过构建TLR4 siRNA慢病毒载体，转染至大鼠巨噬细胞NR8383，并通过实时定量聚合酶链反应(RT-PCR)检测TLR4 siRNA干扰的效果，为进一步探讨TLR4信号通路在ALI发生、发展中的机制提供研究工具。

    1 材料与方法

    1.1 材料与试剂

    聚合酶链反应(PCR)反应试剂，Primer(R&F)合成、dsDNA oligo、293T细胞株、大肠埃希菌菌株DH5α、病毒载体均由上海吉凯基因化学技术有限公司提供；Taq酶、SYBR Master Mixture购于TaKaRa；Age Ⅰ、EcoR Ⅰ、T4 DNA ligase、T4 DNA ligase buffer来自于NEB；QIAGEN Plasmid大抽Kit来自QIAGEN；Rnase Inhibitor、dNTP、M-MLV逆转录酶购于Promega；Lipofectamine 2000、Trizol购自Invitrogen；ECL-PLUS/Kit购于Amersham公司；positive clone测序由上海美季生物技术有限公司完成；胎牛血清、DMEM购自Gibco公司；Opti-MEM购自Invitrogen ......