1 呼吸道上皮细胞的原代培养模式

    虽然在以往的研究中众多学者建立的培养方式有很多，但根据其培养原理的差异性，呼吸道上皮细胞的培养可以归纳起来分为两大类，一类是借助呼吸道组织活性，利用快速处理过的急性分离的呼吸道组织，培养呼吸道细胞，这类方法的特点是爬出的细胞具有高度的组织活性，根据技术手段的不同，操作时间一般在数十分钟至两小时之内，但根据处理方式及培养条件的各异，培养的上皮细胞可能含有较多的杂细胞甚至杂细胞含量过高抑制了上皮细胞的生长，这一类方法可归纳为活性组织培养模式。另一类培养模式是借助不同种类的蛋白酶将呼吸道上皮表面的细胞从呼吸道骨架上消化下来，将消化下来的细胞处理后重悬浮培养，这一类培养方法由于采用了各种不同的蛋白酶，气道上皮细胞的活性受到了破坏，细胞的分化功能会受到损伤，细胞的纯度也会根据所使用酶的种类不同也有所区别，且细胞培养周期一般较长，操作过程根据酶消化的条件不同可达2～24 h不等，这一类方法被归纳为酶消化细胞培养模式，也是目前报道较多的一类培养模式。

    1.1 酶消化细胞培养模式

    酶消化细胞培养是首例呼吸道上皮细胞原代培养，其上皮组织取材来源于人的主支气管，研究者利用型蛋白酶溶解在磷酸盐缓冲液中，在4℃环境下对主支气管的上皮细胞进行消化，消化时间为24 h，结果通过透射电镜与免疫组化等方法对培养的细胞的纤毛分化进行检测，该方法培养的气道上皮细胞纤毛分化较好，但由于过夜消化使得操作时间较长，且消化的细胞贴壁生长不好 ......