健骨颗粒通过G1/S期调控蛋白对成骨细胞增殖的影响(2)
1 材料与方法1.1 实验药物
健骨颗粒由煅狗骨、淫羊藿、山茱萸、山药、党参等药物组成,原药材购自福建省医药公司,由福建中医药研究院中试车间负责加工制备,每克健骨颗粒含原生药2.9 g。戊酸雌二醇(德国BAYER公司生产,批号:199A2),购自福州回春医药连锁有限公司。
1.2 实验动物
6 月龄清洁级雌性SD大鼠30只[购自上海斯莱克实验动物有限责任公司,实验动物合格证号:SCXK(沪)2007-0005,编号:2007000514856],大鼠体重(250±20)g。医学实验动物环境设施为福建中医药大学动物实验中心鼠类实验室,清洁级[许可证号:SYXK(闽)2009-0001]。新生24 h内的SD大鼠4只[购自福建医科大学实验动物中心,动物合格证号:SCXK(闽)2004-00023],以酶消化法分离其颅盖骨成骨细胞进行体外培养。
1.3 实验试剂
Ⅰ型胶原酶、0.25%胰蛋白酶、MTT噻唑蓝(Sigma公司);胎牛血清、青链霉素双抗溶液、低糖DMEM 培养基(新西兰Hyclone公司);细胞碱性磷酸酶(CAKP)染色试剂盒(南京建成生物工程研究所);TRIZOL(美国Invitrogen公司);反转录试剂盒、SYBR GREENⅠ 荧光定量试剂盒(TaKaRa公司);PCR引物合成(上海生工生物技术有限公司);CycleTESTTM Plus DNA Reagent Kit(美国Becton Dickinson公司) ......
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