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编号:12854499
黑老虎中倍半萜类化合物的分离鉴定及抑制NO生成作用研究(2)
http://www.100md.com 2016年4月5日 《中国医药导报》 2016年第10期
     2.2 NO释放抑制活性的测定[6]

    采用RAW 264.7大鼠巨噬细胞,调整细胞浓度到1.2×106/mL,每孔200 μL接种于96孔培养板,5% CO2,37℃培养2 h,加入LPS(终浓度为100 ng/mL)、IFN-γ(终浓度为0.33 ng/mL)、样品DMSO溶液(溶解样品的DMSO相对于培养基的含量为0.2%),培养16 h。取上清液100 μL,加入等体积的Griess试剂[临用前将1%的磺胺磷酸溶液(5%)和0.1%的N-1-Naphthylethylenediamine Dihydrochloride等体积混匀],遮光10 min,用酶联免疫检测仪在570 nm(对照655 nm)测定吸光度。细胞生存率用MTT法进行测定:剩余细胞再加入25 μL MTT(1 mg/mL),培养4 h,弃上清液,加150 μL DMSO,放置5 min,570 nm下读取数值 ......
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