蛇床子素诱导HeLa细胞凋亡的作用机制研究(2)
1 材料与方法1.1 材料
蛇床子素购于Sigma公司;人宫颈癌细胞系HeLa细胞、噻唑蓝(MTT)试剂盒、Bcl-2、Bax抗体购于上海哈灵生物科技有限公司;胎牛血清购于Invitrogen公司;RPMI1640培养液、AnnexinV/PI细胞凋亡检测试剂盒与细胞浆蛋白抽提试剂盒购自上海元龙生物技术有限公司;Hoechst 33342核酸染料购自北京泛博生化有限公司;半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶(caspase)活性检测试剂盒购于上海华雅思创生物科技有限公司;其他试剂购于北京试剂厂。
1.2 方法
1.2.1 细胞培养 培养液为含100 U/mL青霉素、100 μg/mL链霉素、10%胎牛血清的PMI1640。培养条件:37℃,5% CO2,湿度饱和。取对数生长期细胞用于实验。
1.2.2 细胞增殖抑制实验 取1×105/mL的HeLa细胞,接种于96孔板(200 μL/孔),至细胞贴壁后每孔加入终浓度为0、20、40、80、100、120 μg/mL的蛇床子素(样品溶解于DMSO) ......
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