三七总皂苷对子宫内膜癌Ishikawa和HEC—1A细胞增殖、侵袭和凋亡的影响(2)
1.3 Transwell法检测细胞侵袭
以正常培养的子宫内膜癌细胞为对照，以200 μg/mL的PNS处理的细胞为实验组。在Transwell上室聚碳酸酯膜上涂70 μL 1 mg/mL的matrigel胶，在37℃下静置60 min使其在微孔滤膜上重组为基底膜。胰酶消化待测细胞，收集细胞悬液后在离心半径为10 cm的离心机中1000 r/min离心5 min。重悬细胞后接种于Transwell上室内，并于下室中加入含20%胎牛血清的DMEM培养液500 μL，孵育24 h。随后将滤膜上层的细胞用棉签抹去，用甲醇固定滤膜，Giemsa染色15 min。于200倍光镜下计算迁移到下层的细胞数量。
1.4 流式细胞仪检测细胞凋亡
将待测细胞以2×105/孔的密度接种置6孔板，消化细胞，离心后弃去上清液收集细胞。PBS洗涤后离心弃上清液收集细胞，每孔加入100 μL结合缓冲液缓慢吹打，在悬浮细胞中分别加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI进行染色 ......
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以正常培养的子宫内膜癌细胞为对照，以200 μg/mL的PNS处理的细胞为实验组。在Transwell上室聚碳酸酯膜上涂70 μL 1 mg/mL的matrigel胶，在37℃下静置60 min使其在微孔滤膜上重组为基底膜。胰酶消化待测细胞，收集细胞悬液后在离心半径为10 cm的离心机中1000 r/min离心5 min。重悬细胞后接种于Transwell上室内，并于下室中加入含20%胎牛血清的DMEM培养液500 μL，孵育24 h。随后将滤膜上层的细胞用棉签抹去，用甲醇固定滤膜，Giemsa染色15 min。于200倍光镜下计算迁移到下层的细胞数量。
1.4 流式细胞仪检测细胞凋亡
将待测细胞以2×105/孔的密度接种置6孔板，消化细胞，离心后弃去上清液收集细胞。PBS洗涤后离心弃上清液收集细胞，每孔加入100 μL结合缓冲液缓慢吹打，在悬浮细胞中分别加入5 μL Annexin V-FITC和5 μL PI进行染色 ......
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