高糖环境下人骨髓间充质干细胞复合兔脱细胞真皮支架体外成骨能力检测(2)
1 材料与方法
1.1 细胞来源
GFP标记的人骨髓间充质干细胞(hBMSC)购于广州赛业生物公司。
1.2 主要试剂和实验仪器
体重2～3 kg雄性新西兰白兔购自齐齐哈尔医学院动物实验中心[动物合格证号：SYXK(黑)20140022]，胎牛血清(FBS)、α-MEM培养基、青链霉素和L-谷氨酰胺均购于广州赛业生物公司，地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、VEGF、噻唑蓝(MTT)和葡萄糖等均购于美国Sigma公司，兔抗人BMP-1抗体和TRITC标记羊抗兔IgG购自美国Santa cruz公司，人骨形成蛋白-1(BMP-1)、碱性磷酸酶(ALP)的ELISA试剂盒购于美国R&D公司。Emax酶标仪为美国Molecular Devices公司产品，F-7000荧光分光光度计为日立公司产品，BX50型显微镜和SU1510型扫描电子显微镜分别为日本OLYMPUS、日立公司的产品。
1.3 实验方法
1.3.1 脱细胞真皮的制备 8只体重2～3 kg雄性新西兰白兔，按照30 mg/kg耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠，常规备皮、消毒，切取背部6 cm×6 cm全层皮肤，清理周围组织后，首先加入0.9%氯化钠溶液，在37℃摇床孵育12 h ......
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1.1 细胞来源
GFP标记的人骨髓间充质干细胞(hBMSC)购于广州赛业生物公司。
1.2 主要试剂和实验仪器
体重2～3 kg雄性新西兰白兔购自齐齐哈尔医学院动物实验中心[动物合格证号：SYXK(黑)20140022]，胎牛血清(FBS)、α-MEM培养基、青链霉素和L-谷氨酰胺均购于广州赛业生物公司，地塞米松、抗坏血酸、β-甘油磷酸钠、VEGF、噻唑蓝(MTT)和葡萄糖等均购于美国Sigma公司，兔抗人BMP-1抗体和TRITC标记羊抗兔IgG购自美国Santa cruz公司，人骨形成蛋白-1(BMP-1)、碱性磷酸酶(ALP)的ELISA试剂盒购于美国R&D公司。Emax酶标仪为美国Molecular Devices公司产品，F-7000荧光分光光度计为日立公司产品，BX50型显微镜和SU1510型扫描电子显微镜分别为日本OLYMPUS、日立公司的产品。
1.3 实验方法
1.3.1 脱细胞真皮的制备 8只体重2～3 kg雄性新西兰白兔，按照30 mg/kg耳缘静脉注射3%戊巴比妥钠，常规备皮、消毒，切取背部6 cm×6 cm全层皮肤，清理周围组织后，首先加入0.9%氯化钠溶液，在37℃摇床孵育12 h ......
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