假耧斗菜中化学成分的研究(1)
[摘要] 目的 研究假耧斗菜中的化学成分。 方法 运用多种方法对其化学成分进行纯化和鉴定，并运用3-(4，5-二甲基吡啶-2)-5-(3-羧基甲氧基苯基)-2-(4-磺苯基)-2-氢-四唑盐(MTS)比色法考察了化合物Ⅰ和Ⅱ的对肺癌细胞H460、人乳腺癌细胞MCF-7和人肝癌细胞Hep G2的体外抗肿瘤活性。 结果 共分离得到7个化合物，分别为：Paraquinin A(Ⅰ)、Praquinin B(Ⅱ)、小檗碱(Ⅲ)、Menisdaurin(Ⅳ)、3，4-二甲基苯甲酸(Ⅴ)、对羟基苯甲酸(Ⅵ)、己内酰胺(Ⅶ)，抗肿瘤活性结果显示化合物Ⅰ和Ⅱ均无细胞毒活性。 结论 化合物Ⅲ～Ⅶ为首次从该植物中分离得到，并首次测试了化合物Ⅰ和Ⅱ的抗肿瘤活性。
[关键词] 假耧斗菜；化学成分；碳苷；氰苷
[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2016)06(a)-0008-03
[Abstract] Objective To investigate the chemical constituents of Paraquilegia microphylla. Methods The constituents were separated and purified by chromatographic methods， and their structures were elucidated by spectroscopic methods， compounds Ⅰ and Ⅱ were evaluated for their cytotoxicity against human H460 non-small cell lung cancer cells (H460)， the breast cancer cell line MCF-7 (MCF-7) and human hepatocellular cell line Hep G2 (Hep G2) by [3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) method. Results Seven known compounds were obtained and1identified as Paraquinin A (Ⅰ)， Praquinin B (Ⅱ)， Berberine (Ⅲ)， Menisdaurin (Ⅳ)， 3，4-dimethyl benzoic acid (Ⅴ)， 4-hydroxybenzoic acid (Ⅵ) and caprolactam (Ⅶ)， the results of the cytotoxicity about compounds Ⅰ and Ⅱ were inactive against several human cancer cells. Conclusion Compounds Ⅲ-Ⅶ are isolated from this plant for the first time， the cytotoxicity of compounds Ⅰ and Ⅱ against several human cancer cells were tested for the first time.
[Key words] Paraquilegia microphylla； Chemical composition； Flavonoid C-glycoside； Cyanogenic glycoside
假耧斗菜Paraquilegia microphylla (Royle) Drunmm.Et Hutch.为毛茛科的假耧斗菜属植物，主要分布于西藏、四川、甘肃、云南、青海等地。假耧斗菜为西藏常用中草药，具有镇痛、催产的功效[1]。假耧斗菜属植物中含有皂苷类、酚酸类、黄酮类化合物及生物碱类化合物[2-13]。前人从中分离得到3个黄酮碳苷[9]和2个三萜皂苷[10]。本研究进一步对其化学成分进行研究，得到7个化合物。见如图1。分别为Paraquinin A (Ⅰ)、Praquinin B (Ⅱ)、小檗碱 (Ⅲ)、Menisdaurin (Ⅳ)、3，4-二甲基苯甲酸 (Ⅴ)、对羟基苯甲酸(Ⅵ)和己内酰胺(Ⅶ)。化合物Ⅲ～Ⅶ为首次从该植物中分离得到。采用MTS比色法测试了化合物Ⅰ和Ⅱ对H460、MCF-7和 Hep G2的体外抗肿瘤活性。
1 仪器与材料
核磁共振仪Varian NMR system 600，Waters 600半制备型高效液相色谱仪，质谱仪Q-TOF micro mass spectrometer (Waters) 型。色谱用硅胶G和H(青岛海洋化工厂产品)，反相硅胶RP-18(Merck 公司)。
药材于2012年4月由西藏自治区食品药品检验所提供，由西藏自治区食品药品检验所格桑索朗副主任药师鉴定为假耧斗菜。
2 方法与结果
2.1 提取与分离
假耧斗菜地上部分5.5 kg，用95%乙醇冷浸提取3 次，每次7 d，减压浓缩得到浸膏330 g。取300 g浸膏悬浮于50℃的热水中，依次用石油醚﹑乙酸乙酯萃取，减压浓缩得到石油醚浸膏A(100 g)、乙酸乙酯浸膏B(30 g)和剩余水部分C。
C部分经D-101大孔树脂柱色谱，分别用水、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脱得C1～C3；C1经硅胶柱色谱，乙酸乙酯∶甲醇(25∶1～0∶1)梯度洗脱分为C1-1～C1-5五部分，C1-1经反复硅胶柱层析得到化合物Ⅰ(158 mg)，C1-2经反复硅胶柱层析得到化合物Ⅱ(221 mg)；C1-4经反复硅胶柱层析 (乙酸乙酯∶甲醇15∶1)得到化合物Ⅲ(10 mg)； (王姣姣 吴润 李嘉敏)
[关键词] 假耧斗菜；化学成分；碳苷；氰苷
[中图分类号] R927 [文献标识码] A [文章编号] 1673-7210(2016)06(a)-0008-03
[Abstract] Objective To investigate the chemical constituents of Paraquilegia microphylla. Methods The constituents were separated and purified by chromatographic methods， and their structures were elucidated by spectroscopic methods， compounds Ⅰ and Ⅱ were evaluated for their cytotoxicity against human H460 non-small cell lung cancer cells (H460)， the breast cancer cell line MCF-7 (MCF-7) and human hepatocellular cell line Hep G2 (Hep G2) by [3-(4，5-dimethylthiazol-2-yl)-5-(3-carboxymethoxyphenyl)-2-(4-sulfophenyl)-2H-tetrazolium (MTS) method. Results Seven known compounds were obtained and1identified as Paraquinin A (Ⅰ)， Praquinin B (Ⅱ)， Berberine (Ⅲ)， Menisdaurin (Ⅳ)， 3，4-dimethyl benzoic acid (Ⅴ)， 4-hydroxybenzoic acid (Ⅵ) and caprolactam (Ⅶ)， the results of the cytotoxicity about compounds Ⅰ and Ⅱ were inactive against several human cancer cells. Conclusion Compounds Ⅲ-Ⅶ are isolated from this plant for the first time， the cytotoxicity of compounds Ⅰ and Ⅱ against several human cancer cells were tested for the first time.
[Key words] Paraquilegia microphylla； Chemical composition； Flavonoid C-glycoside； Cyanogenic glycoside
假耧斗菜Paraquilegia microphylla (Royle) Drunmm.Et Hutch.为毛茛科的假耧斗菜属植物，主要分布于西藏、四川、甘肃、云南、青海等地。假耧斗菜为西藏常用中草药，具有镇痛、催产的功效[1]。假耧斗菜属植物中含有皂苷类、酚酸类、黄酮类化合物及生物碱类化合物[2-13]。前人从中分离得到3个黄酮碳苷[9]和2个三萜皂苷[10]。本研究进一步对其化学成分进行研究，得到7个化合物。见如图1。分别为Paraquinin A (Ⅰ)、Praquinin B (Ⅱ)、小檗碱 (Ⅲ)、Menisdaurin (Ⅳ)、3，4-二甲基苯甲酸 (Ⅴ)、对羟基苯甲酸(Ⅵ)和己内酰胺(Ⅶ)。化合物Ⅲ～Ⅶ为首次从该植物中分离得到。采用MTS比色法测试了化合物Ⅰ和Ⅱ对H460、MCF-7和 Hep G2的体外抗肿瘤活性。
1 仪器与材料
核磁共振仪Varian NMR system 600，Waters 600半制备型高效液相色谱仪，质谱仪Q-TOF micro mass spectrometer (Waters) 型。色谱用硅胶G和H(青岛海洋化工厂产品)，反相硅胶RP-18(Merck 公司)。
药材于2012年4月由西藏自治区食品药品检验所提供，由西藏自治区食品药品检验所格桑索朗副主任药师鉴定为假耧斗菜。
2 方法与结果
2.1 提取与分离
假耧斗菜地上部分5.5 kg，用95%乙醇冷浸提取3 次，每次7 d，减压浓缩得到浸膏330 g。取300 g浸膏悬浮于50℃的热水中，依次用石油醚﹑乙酸乙酯萃取，减压浓缩得到石油醚浸膏A(100 g)、乙酸乙酯浸膏B(30 g)和剩余水部分C。
C部分经D-101大孔树脂柱色谱，分别用水、30%乙醇、60%乙醇、95%乙醇洗脱得C1～C3；C1经硅胶柱色谱，乙酸乙酯∶甲醇(25∶1～0∶1)梯度洗脱分为C1-1～C1-5五部分，C1-1经反复硅胶柱层析得到化合物Ⅰ(158 mg)，C1-2经反复硅胶柱层析得到化合物Ⅱ(221 mg)；C1-4经反复硅胶柱层析 (乙酸乙酯∶甲醇15∶1)得到化合物Ⅲ(10 mg)； (王姣姣 吴润 李嘉敏)