Stomatin样蛋白2通过PI3K通路对儿童哮喘的影响(2)
1.3.4 Western blot检测STOML2及PI3K的蛋白表达量 RIPA裂解细胞后测定蛋白浓度，随后将25 μg 蛋白经12% SDS-PAGE分离后，电转到硝酸纤维素膜上。而后，用PBS封闭液(含3%脱脂奶粉，0.1% Tween-20)对膜进行封闭(室温封闭1 h)。封闭后，加入STOML2(1∶800)、PI3Kp85(1∶500)及β-actin(1∶1000)一抗，4℃孵育过夜，随后用辣根过氧化物酶标记的二抗(1∶2000)室温孵育2 h。用ECL发光系统检测目的条带，Image Pro Plus 6.0软件对条带进行灰度分析。
1.3.5 MTT法检测细胞生长 将对数生长期细胞以5×103个/孔接种于96孔培养板。当细胞达到80%融合时，按步骤转染pCDNA3.1-STOML2重组质粒，并于转染后72 h进行MTT实验检测。每孔加入20 μL MTT(5 mg/mL)后加入150 μL二甲基亚砜。然后用酶标仪测定490 nm处吸光值 ......
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1.3.5 MTT法检测细胞生长 将对数生长期细胞以5×103个/孔接种于96孔培养板。当细胞达到80%融合时，按步骤转染pCDNA3.1-STOML2重组质粒，并于转染后72 h进行MTT实验检测。每孔加入20 μL MTT(5 mg/mL)后加入150 μL二甲基亚砜。然后用酶标仪测定490 nm处吸光值 ......
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