单色多重荧光实时定量PCR测定端粒长度(2)

http://www.100md.com 2016年7月5日 《中国医药导报》2016年第19期

     3′；telc 5′-TGTTAGGTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTATCCCTAACA-3′；hbgu 5′-CGGCGGCGGGCGGCGCGGGCTGGGCGGCTTCATCCACGTTCACCTTG-3′；hbgd 5′-GCCCGGCCCGCCGCGCCCGTCCCGCCGGAGGAGAAGTCTGCCGTT-3′。反应体系：SYBR GreenⅠ Master(罗氏公司)7.5 μL，样本DNA 5 μL(待测样本DNA含量为35 ng，标准品含量依次为225、90、36、14.4、5.76 ng)，端粒引物telg、telc终浓度均为500 nmol/L； 单拷贝基因引物HBGU、HBGD终浓度均为200 nmol/L。反应在同一块384孔板上进行，标准品和待测样本均设置3复孔，另外设置以相同体积的超纯水作为DNA的阴性对照，亦为3个复孔。使用仪器为LightCycler 480实时荧光定量PCR仪(罗氏公司)。反应条件为Ⅰ：95℃ 15 min；Ⅱ：94℃ 15 s ......