远端缺血预处理对兔脊髓缺血再灌注损伤后血—脊髓屏障的保护作用及相关机制研究(2)
1.5 BSCB通透性检测
通过定量和定位分析脊髓组织中伊文思蓝(Evans blue，EB)外渗量，可评价BSCB破坏程度和部位[10]。将2%的EB经兔耳缘静脉缓慢匀速注射(10 mL/kg)，1 h后将动物再次麻醉，经升主动脉灌注0.9%生理盐水500 mL/kg，取出脊髓。①酶标仪定量：取脊髓节段L4～L6一部分，称重，浸泡在4 mL甲酰胺溶液中，60℃避光水浴抽提24 h。20 000 r/min离心20 min，取上清液，用酶标仪检测(λ=632 nm)OD值，根据标准曲线计算出每克脊髓组织中EB含量(μg/g)。②荧光定位：取脊髓节段L4～L6一部分，置入4%多聚甲醛内固定，1周内沉糖。冰冻切片机上于-20℃连续切片(10 μm)，在荧光显微镜(Nikon，日本)下观察切片，分析BSCB完整性破坏的程度和部位。
1.6 Western blot法测相关蛋白表达
通过Western blot法检测claudin-5、occludin及BDNF蛋白在脊髓组织中的表达水平 ......
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通过定量和定位分析脊髓组织中伊文思蓝(Evans blue，EB)外渗量，可评价BSCB破坏程度和部位[10]。将2%的EB经兔耳缘静脉缓慢匀速注射(10 mL/kg)，1 h后将动物再次麻醉，经升主动脉灌注0.9%生理盐水500 mL/kg，取出脊髓。①酶标仪定量：取脊髓节段L4～L6一部分，称重，浸泡在4 mL甲酰胺溶液中，60℃避光水浴抽提24 h。20 000 r/min离心20 min，取上清液，用酶标仪检测(λ=632 nm)OD值，根据标准曲线计算出每克脊髓组织中EB含量(μg/g)。②荧光定位：取脊髓节段L4～L6一部分，置入4%多聚甲醛内固定，1周内沉糖。冰冻切片机上于-20℃连续切片(10 μm)，在荧光显微镜(Nikon，日本)下观察切片，分析BSCB完整性破坏的程度和部位。
1.6 Western blot法测相关蛋白表达
通过Western blot法检测claudin-5、occludin及BDNF蛋白在脊髓组织中的表达水平 ......
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