Ki—67、Bmi—1蛋白在结肠癌患者中的表达及预后分析(2)

http://www.100md.com 2016年8月15日 《中国医药导报》2016年第23期

     1.2 试剂

    Bmi-1兔抗人单克隆抗体购自美国AB-GENT公司，Ki-67兔抗人单克隆抗体，即用型S-P免疫组化染色试剂盒均为Santa cruz公司产品(北京中杉金桥生物技术有限公司)，用已知阳性标本作为阳性对照， 以PBS代替一抗为阴性对照。

    1.3 方法

    所有标本均经10%中性福尔马林溶液固定，石蜡包埋，连续制成4 μm厚切片若干张，均进行SP法免疫组化染色，实验步骤按试剂盒说明书进行。

    1.4 免疫结果的判定

    Ki-67定位于细胞核，呈棕黄色颗粒沉着，每张切片观察5个高倍镜视野，每个视野计数100个肿瘤细胞，共计500个细胞，阳性细胞所占比例≥10%为阳性，<10%为阴性。Bmi-1阳性染色为棕黄褐色颗粒，定位于细胞质内。采用双评分法判定结果：①5个高倍镜视野(400倍)，按阳性细胞百分率(A值)评分：< 25%为1分，25%～50%为2分，>50%为3分；②按染色强度(B值)评分：不着色为0分，浅棕黄色为1分，棕黄色为2分，棕褐色为3分 ......