两种非整合载体重编程人脐带血CD34+细胞形成诱导多能干细胞的研究(3)

http://www.100md.com 2016年8月25日 《中国医药导报》2016年第24期

     1.2.7 畸胎瘤形成实验 分别选取核型鉴定正常的重编程的iPS细胞传代扩增，传至第9代时，accutase进行消化去掉杂细胞，加入PBS终止消化。约5×106细胞重悬到PBS与Matrigel solution(1∶1)稀释的200 μL的溶液中，注射到NOD/SCID免疫缺陷小鼠腋窝皮下，2个月左右可观察到畸胎瘤形成，取下畸胎瘤，10%甲醛固定24 h，石蜡包埋，HE染色，显微镜下观察畸胎瘤组织形态。

    1.3 统计学方法

    采用GraphPad Prism 5.0软件处理分析结果数据，计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示，两组间比较采用t检验；以P < 0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 重编程过程中克隆形态变化及诱导效率观察

    两种游离型载体pEB-C5(C5)+pEB-Tg(Tg)和pEV SFFV-OS(OS)+pEV SFFV-MK(MK)+ pEV SFFV-B(B)重编程CB CD34+细胞形成的iPSCs的过程中 ......