化瘀祛湿方对早期膝骨关节炎滑膜成纤维细胞COX—2 mRNA表达的影响(3)

http://www.100md.com 2016年8月25日 《中国医药导报》2016年第24期

     1.5.7 实时荧光定量聚合酶链式反应(RT-PCR)检测 RT-PCR引物由PrimerPremier6.0设计引物，Oligo7评估引物，最后由上海生工合成引物(表1)。按SYBR Green染料法荧光定量RT-PCR检测：为最大程度保证实验结果，在打开之前将其融解，并于微型离心机上轻微离心；准备100×浓度的PCR引物溶液(30 μmol/L)；将反应管置于冰上，在50-μL的单个PCR反应体系中，依次加入Fast Start Universal SYBR Green Master(ROX)、正向引物(30 μmol/L)、反向引物(30 μmol/L)、水、PCR等级cDNA反应液组分；并按程序运行PCR仪(图1)。反应结束后确认RT-PCR的扩增曲线和融解曲线。

    1.6统计学方法

    采用SPSS 18.0进行分析，计量资料采用均数±标准差(x±s)表示，采用单因素方差分析，以P < 0.05为差异有统计学意义。

    2 结果

    2.1 扩增曲线分析

    在扩增曲线上的线性增长期 ......