NEK2对肝癌细胞株HepG2迁移侵袭的影响及其机制的研究(3)
1.2.5 蛋白质印迹法检测干扰后相关蛋白的表达 siRNA转染HepG2细胞48 h后，加入蛋白裂解液冰上裂解5 min，冷冻离心提取蛋白，进行定量，经BCA法检测蛋白浓度。将每个蛋白样品40 μg加样后进行8%SDS-PAGE电泳，转移至PDVF膜上，在含5%脱脂奶粉的TBST中封闭1 h后，然后TBST洗3次，每次10 min。分别加入一抗：NEK2一抗(1∶1000稀释)、MMP2一抗(1∶1000稀释)、TIMP-1一抗(1∶2000稀释)、MMP9一抗(1∶1000稀释)、GAPDH一抗(1∶10 000稀释)4℃温育过夜。次日TBST洗3次，再与稀释1∶10 000羊抗鼠多克隆二抗作用30 min，TBST洗3次。最后用ECL显影液化学发光显影，AlphaEaseFC凝胶图像软件处理系统分析目标带的光密度值。
1.3 统计学方法
采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；计数资料用率表示 ......
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1.3 统计学方法
采用SPSS 16.0统计学软件进行数据分析，计量资料数据用均数±标准差(x±s)表示，多组间比较采用单因素方差分析，组间两两比较采用LSD-t检验；计数资料用率表示 ......
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