LncRNA—AK058003诱导肝癌细胞凋亡的作用机制(2)
1.4 脂质体转染人肝癌细胞系
细胞融合度达50%～80%时，更换成无血清培养基培养2 h。分别用Optimem稀释lip2000(Thermo，Invitrogen)和质粒，静置5 min后将两者轻轻混合，室温孵育20 min加入培养皿内继续培养[10]。
1.5 细胞凋亡检测
收集转染48 h的肿瘤细胞上清，用胰酶消化细胞，PBS洗涤两次，用凋亡试剂盒(杭州联科生物技术股份有限公司)240 μL 1xBinding buffer重悬细胞，调整细胞浓度为2×105/mL，加入5 μL Annexin V-APC和10 μL 7-氨基放线菌素D(7-AAD)轻轻混匀，室温避光反应30 min，再加入260 μL 1×Binding buffer稀释。用流式细胞仪分析(Becton-Dickinson，USA)，采用FACS express version 3软件分析结果。
1.6 蛋白质免疫印迹实验(Western blot)
提取肝癌细胞系总蛋白 ......
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细胞融合度达50%～80%时，更换成无血清培养基培养2 h。分别用Optimem稀释lip2000(Thermo，Invitrogen)和质粒，静置5 min后将两者轻轻混合，室温孵育20 min加入培养皿内继续培养[10]。
1.5 细胞凋亡检测
收集转染48 h的肿瘤细胞上清，用胰酶消化细胞，PBS洗涤两次，用凋亡试剂盒(杭州联科生物技术股份有限公司)240 μL 1xBinding buffer重悬细胞，调整细胞浓度为2×105/mL，加入5 μL Annexin V-APC和10 μL 7-氨基放线菌素D(7-AAD)轻轻混匀，室温避光反应30 min，再加入260 μL 1×Binding buffer稀释。用流式细胞仪分析(Becton-Dickinson，USA)，采用FACS express version 3软件分析结果。
1.6 蛋白质免疫印迹实验(Western blot)
提取肝癌细胞系总蛋白 ......
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