1.4 实时定量RT-PCR(Real-time RT-PCR)检测

    采用Real-time RT-PCR检测壳聚糖薄膜和普通平板培养的MSCs细胞干性相关基因的表达。

    自P1代获得的MSCs以相同密度接种到壳聚糖薄膜和常规平板培养后72 h，收集MSCs，用RNA提取试剂盒(Invitrogen)提取总RNA，先用逆转录酶试剂盒(TIANSGEN，中国)转录成cDNA，取2 μL cDNA为PCR扩增的模板。用SYBR Green PCR Master Mix (Roche Diagnostics，Basel，Switzerland)在PCR仪(Bio-Rad)定量分析。用GAPDH进行归一化处理，靶基因的表达用mRNA改变与参考基因比较的倍数表示。Real-time RT-PCR引物见表1。

    1.5 蛋白印迹法(Western blot)

    采用Western blot检测MSCs细胞干性相关基因蛋白的表达。从壳聚糖薄膜和普通平板培养获得的MSCs用预冷的RIPA缓冲液裂解30 min，然后4°C 16 000 r/min离心10 min，收集上清液，用BCA试剂盒(Beyotime)检测总蛋白量 ......