1.3 植物DNA提取、PCR扩增和测序

    将白花蛇舌草和3种混伪品的干燥植物分别用研钵碾成粉末，各取30 mg置离心管中，按照试剂盒说明书提取DNA。收集DNA溶液，-20℃冰箱保存。正向引物为ITS2F：5'-ATGCGATACTTGGTGTGAAT-3'，反向引物为ITS3R：5'-GACGCTTCTCCAGACTACAAT-3'[19]。PCR反应体系包括25 μL 2×ES Taq Master Mix，2 μL正向引物ITS2F，2 μL反向引物ITS3R，9 μL超纯水，12 μL模板(基因组DNA)，体系配制共为50 μL。使用PCR仪进行扩增，扩增程序：Step1：94℃变性5 min；Step2：94℃变性30 s，56℃退火30 s，72℃延伸45 s(进行40个循环)；Step3：72℃延伸10 min。PCR产物在0.7%的琼脂糖凝胶上电泳跑胶，获得单一条带后，将PCR产物送至华大基因貿易有限公司利用DNA分析仪进行双向测序。

    1.4 数据处理

    运用Codon Code Aligner 6.02(Condon Code Co. ......