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编号:13068759
三种不同腺病毒基因组提取方法对全基因组克隆构建的影响分析(1)
http://www.100md.com 2016年12月25日 《中国医药导报》 2016年第36期
三种不同腺病毒基因组提取方法对全基因组克隆构建的影响分析,病毒核酸提取,酶切分析,病毒感染,Hirt's方法
     [摘要] 目的 建立一种简单、快速、有效、纯度高的人腺病毒全基因组提取的方法。 方法 用60 mm细胞培养皿培养A549或AD293细胞,接种培养人7型腺病毒(HAdV-7)CQ1198株,收集病毒感染的細胞,分别用Hirt's改良法、试剂盒A和试剂B提取HAdV-7-CQ1198病毒株全基因组,提取的基因组进行限制性内切酶酶切实验、细菌内同源重组实验和转染细胞拯救病毒实验。 结果 几种方法都成功获得高质量的腺病毒全基因组,可以用于PCR、测序、酶切、同源重组和转染实验;两种试剂盒方法较传统的Hirt's改良法更快,不需要特别步骤去除细胞基因组,可以在1 h内完成基因组提取。其中,试剂盒A提取的病毒基因组量最多(20~50 μg),RNA含量最少,不需要另外加入核糖核酸酶(RNase),而Hirt's改良法需要在裂解液中或最终产物中加入RNase以去除细胞RNA成分 ......
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