真核表达载体pEGFP-C1购自Clonetech公司；含有全长HPV-18E6基因序列的載体pCMV/HPV-18E6来自本实验室；质粒大量提取试剂盒为QIAGEN产品，限制性内切酶BglⅡ、EcoRⅠ，T4 DNA ligase、Taq酶等均购自Takara公司；转染试剂Lipofectamine2000购自Invitrogen公司。

    1.2 方法

    1.2.1 树突细胞培养 脱颈处死C57BL/6小鼠，用75%乙醇浸泡5 min，无菌剥离股骨、胫骨及肱骨，去除附着肌肉，剪去骨骺两端，用注射器反复冲洗骨髓腔，离心收集骨髓细胞，加入37℃预热的Tris-NH4Cl裂解红细胞，PBS洗涤2次，加入IL-4(500 μg/mL) 和GM-CSF(800 μg/mL)，经流式细胞仪检测表面标记分子证实为树突细胞。用含10%胎牛血清的RPMI1640完全培养液调整细胞密度至3×109 个/mL，接种于6孔板中，于37℃，5%CO2孵箱中培养，弃去悬浮细胞，加入新鲜的完全培养基并补充相同浓度的细胞因子，隔日半量换液，每日在相差显微镜下观察树突细胞的形态 ......