miR—27b在雌激素受体阳性的乳腺癌细胞上皮间质转化及他莫昔芬耐药中的调控机制(2)
1 材料与方法1.1 细胞培养
ER阳性且他莫昔芬敏感(TamS)的乳腺癌细胞MCF-7购自美国ATCC细胞库。采用低剂量逐步加量法诱导他莫昔芬耐药的(TamR)MCF-7细胞。肿瘤细胞用RMPI-1640培养基培养,添加10% FBS,2 mmol/L谷氨酰胺,100 U青霉素/mL和100 μg链霉素/mL。
1.2 细胞转染
miR-27b模拟物(mimics),HMGB3si-RNA(si-HMGB3)和对应的阴性对照购自锐博生物。参考转染试剂Lipofectamie 2000(Invitrogen)说明书进行转染。
1.3 生物信息学预测
使用Target Scan 7.1预测miR-27b和HMGB3的结合位点。
1.4 RNA提取及实时荧光定量
按照TRIzol RNA提取试剂盒说明书提取细胞总RNA。应用TaqMan miRNA逆转录试剂盒(Applied Biosystems)将RNA逆转录为cDNA ......
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