乌苏里蝮蛇血凝酶的分离纯化和质量研究(3)
另精密量样品溶液1 mL,同法测定。从线性回归方程计算溶液中的蛋白质浓度,结果得蛋白浓度为99.9%。2.9 酶比活力测定
1个蛇毒血凝酶单位是指在(37±0.5)℃条件下,能使1 mL标准人血浆在(60±20)s内振摇出现白色絮团时蛇毒血凝酶的量。比活力公式为:比活力=供试品中蛋白的微克数/供试品中的效价。
标准人血浆的配制:取标准人血浆1支,加水1.0 mL使溶解,即得。样品溶液的配制:称取WH适量,加水溶解并稀释成5.40 μg/mL的溶液,即得。精密量取标准人血浆1 mL,置小试管中(37±0.5)℃水浴中保温2 min,精密加入样品溶液1 mL,立即摇匀,同时计时,于(37±0.5)℃水浴中观察血浆应在(60±20)s内振摇出现白色絮团。依据“2.8”项下测定的蛋白量,计算样品溶液中每单位蛋白微克数,得到WH的比活力为5.40 μg/U。
2.10 对牛纤维蛋白原作用方式分析
纤维蛋白原是一种由肝脏合成的具有凝血功能的蛋白质,是纤维蛋白的前体。分子量约34 kD,血浆中参考值2~4 g/L。纤维蛋白原由α、β、γ三对不同多肽链所组成,多肽链间以二硫键相连。在凝血酶作用下,α链或β链分别释放出A肽与B肽,生成纤维蛋白单体。在此过程中,由于释放了酸性多肽 ......
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