mdig基因在人胰腺癌中的表达及其促癌作用(2)
1 材料与方法1.1 细胞系及细胞培养
人胰腺癌细胞PANC1、MIAPaca2以及人正常胰腺导管细HPDE6c7(H6c7)购自中国科学院上海细胞库。细胞用含10%胎牛血清(NQBB,USA)、1%双抗(Thermo Fisher Scientific,美国)的完全培养基培养并置于37℃,含5% CO2的培养箱中。
1.2 细胞转染
mdigsi RNA由上海吉凯基因化学技术有限公司合成。细胞转染前24 h接种于六孔板中,使细胞第2天的细胞融合率为70%左右。按照说明书操作步骤用Lipofectamine 2000(Invitrogen,美国)和mdig基因的干扰质粒或空载质粒转染细胞4~6 h后,换液继续培养细胞。将转染mdigsi RNA质粒的胰腺癌细胞PANC1和MIAPaca2设为实验组,将转染空载质粒的胰腺癌细胞PANC1和MIAPaca2设为对照组。
1.3 观察指标
1.3.1 mRNA表达的检测 用TRIzol(Invitrogen ......
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