1.3 菌株鉴定

    以《真菌鉴定手册》[13]和《半知菌属图解》[14]为参考，对纯化后的菌株进行基本的分类，包括从菌株的群体形态和个体形态进行比较，具有相似形态的菌株归为同类。

    采用CTBA法提取真菌基因组DNA。ITS扩增使用的引物为ITS1(TCCGTAGGTGAACCTGCGG)和ITS4(TCCTCCGCTTATTGATATGC)，两者为通用引物，由上海生工生物工程公司合成。50 μL PCR反应体系为：5 μL 5×PCR Buffer，4 μL dNTPs(10 mmol/L)，1 μL ITS1，1 μL ITS4，0.3 μL Tap酶，1 μL DNA模板，其余用ddH2O补足，终体积为50 μL。PCR扩增条件为：预变性94℃ 4 min，变性94℃ 1 min，退火56℃ 1 min，延伸72℃ 1 min 30 s，循环32次，最后延伸72℃ 10 min。扩增后送昆明硕擎生物公司测序，测序结果在NCBI的GenBank数据库中通过Blast搜索对比。以相似度最高的序列为参考，并用于系统发育分析 ......