1.2 免疫组库测序技术发展

    在20世纪90年代，免疫扫描谱型分析被用来对BCR和TCR进行研究[9]，Gorski利用免疫扫描谱型分析技术来分析TCRbeta链基因多样性，并指出其多样性与机体的免疫功能状态相关。而利用B细胞或T细胞V-J基因配对组合，可测出CDR3的长度[10]，虽然价格相对便宜，但是对CDR3序列研究仍然相对模糊。随后出现了Sanger测序是对编码BCR或TCR上可变区的DNA片段进行测序，但测序的数量相对有限，制约了该技术的应用与推广。流式免疫分析技术及CDR3扫描分析技术可将B细胞或T细胞分开，进而弥补了Sanger测序在数量上受限的不足，随后研究通过有限稀释方法，将单个B细胞抗体基因克隆并表达，研究特定抗体的特性和功能，进而分离疾病相关抗体，特别是分离出与病原体相关抗体[12]。而相比Sanger测序技术，以Roche454[13]、Illuminasolexa[14]为代表的二代高通量测序技术目前应用最广，其主要依赖DNA模板PCR扩增，以增强荧光捕捉信号，利用二代高通量免疫组库测序技术，可得到难以预测的深度、分辨度和精度，但二代测序技术需要逆转录及PCR扩增[15]。而随后出现的以Helicos[16]单分子测序为代表的三代测序方法，是不需要进行PCR扩增，直接检测单个碱基信号，相比于二代测序技术，三代测序技术准确率更高。这些免疫测序技术用于VDJ基因装配和CDR识别 ......